Проведение молекулярно-генетической экспертизы

Оглавление:

Молекулярно-генетическая экспертиза

Медицинская молекулярно-генетическая экспертиза

Медицинская молекулярно-генетическая экспертиза вещественных доказательств исследует объекты биологического происхождения. Экспертные исследования проводятся в специализированных экспертных учреждениях.

Обязательными вопросами, формулируемыми при назначении судебно-медицинской молекулярно-генетической экспертизы, являются вопросы об установлении природы объектов, подлежащих исследованию, а также об их видовой принадлежности. Эти вопросы формулируют так же, как и при назначении обычной судебно-биологической экспертизы вещественных доказательств.

Вещественные доказательства, обнаруженные на месте происшествия, изымают в соответствии с определенным правилами, строгое следование которым позволяет предотвратить возможность взаимного загрязнения объектов. К таким правилам относятся:

  1. Изъятие вещественных доказательств биологического происхождения производят в стерильных резиновых перчатках с использованием стерильных пинцетов и скальпелей.
  2. Для изъятия каждого объекта используют отдельные инструменты. Когда это невозможно, после окончания работы с каждым объектом, инструменты обрабатывают тампоном, смоченном в этиловом спирте, а затем протирают стерильным сухим тампоном.
  3. Изъятые объекты высушивают при комнатной температуре, избегая попадания прямых солнечных лучей.

По возможности вещественные доказательства, на которых предполагается наличие следов биологического происхождения, изымаются целиком. В тех случаях, когда изъять предмет цели¬ком не представляется возможным (например, вследствие его больших размеров), следы изымают вместе с частью их носителя. Допустимо делать соскобы, однако категорически запрещается смывать следы на марлевые или ватные тампоны, смоченные водой или изотоническим раствором хлорида натрия (физиологическим раствором). Следы биологического происхождения, располагающиеся на почве, изымают вместе с ней. Со снега биологические следы изымают на марлевые тампоны, которые затем высушивают.

Упакованное вещественное доказательство биологического происхождения опечатывается, на поверхности упаковки делают поясняющую надпись: указывают наименование вещественного доказательства, дату и место его изъятия. Эти сведения заверяют подписями следователя, специалиста, проводившего изъятие, понятых

Образцами биологического материала для сравнительного исследования могут служить любые биологические ткани подозреваемого лица или потерпевшего, содержащие ДНК. Чаще всего для этой цели используют образцы крови. Образцы крови берут из пальца или локтевой вены в количестве 3-5 мл в специальные пробирки типа «вакутейнер» с антикоагулянтом (натриевая или калиевая соль ЭДТА). Пробирки с кровью хранят при температуре +(4-8)°С. Они должны быть доставлены в лабораторию для исследования не позднее чем через двое суток с момента взятия пробы. При отсутствии возможности получить образец жидкой крови для сравнительного исследования предоставляют кровь, высушенную на стерильном марлевом тампоне.

В качестве образца биологического материала, содержащего сравнительный образец ДНК, можно использовать буккальный эпителий. Образец буккального эпителия помещают на стерильный ватный тампон с внутренней стороны щеки после предварительного прополаскивания рта водой. Тампон высушивают при комнатной температуре, либо помещается в консервирующий раствор для сохранения ДНК.

Обязательными вопросами, формулируемыми при назначении судебно-медицинской молекулярно-генетической экспертизы, являются вопросы об установлении природы объектов, подлежащих исследованию, а также об их видовой принадлежности.

Несмотря на определенное сходство вопросов, решаемых традиционной судебно-биологической и молекулярно-генетической экспертизами, технология их решения принципиально различна. Если при проведении традиционной судебно-биологической экспертизы анализируют различные вещества: белки, гликопротеины, гликолипиды, синтез которых детерминирован (предопределен) генами (определенными участками ДНК, контролирующими образование какого-либо признака), т.е. проводится опосредованный анализ генетической информации, то при молекулярно-генетическом анализе исследуют непосредственный носитель наследственных признаков — ДНК. При этом информативность анализа существенно повышается, поскольку исследуют не только кодирующие участки ДНК (определяющие синтез тех или иных групповых субстанций), но и некодирующие участки, обладающие большой генетической полиморфностью, и исследование которых возможно только при непосредственном анализе ДНК.

Молекулярно-генетическое исследование биологических объектов целесообразно проводить только после традиционного биологического исследования, поскольку в ряде случаев уже при определении антигенных профилей ряд вопросов может быть решен в категорической форме (например, в случаях исключения происхождения биологических следов от лиц, чьи образцы были представлены для сравнительного исследования).

Экспертное исследование ДНК, как правило, проводят в виде дополнительной экспертизы после выполнения биологических исследований в тех случаях, когда следствием результаты последней были расценены как недостаточно информативные.

www.granat-expert.ru

Что нужно для проведения анализа

Для проведения генетического исследования необходимо предоставить нам образцы биологического материала тестируемых лиц и заключить договор на проведение исследования.

Для установления отцовства достаточно участия предполагаемого отца и ребенка. Участие матери ребенка при установлении отцовства не обязательно, но если в тесте принимает участие не только отец, но и мать ребенка – достоверность теста становится максимально возможной.

В качестве стандартных образцов биологического материала служат защечные мазки. Процедура их забора совершенно безболезненна, безопасна и занимает не более 5 минут.
Более того, при необходимости Вы можете сделать это самостоятельно в домашних условиях, получив в МЦ «СТАТУС» необходимые для этого наборы зондов для защечного мазка и подробную инструкцию.

Использование самых современных методов генетической экспертизы позволяет нам анализировать широкий спектр нестандартных образцов ДНК, таких как пятна крови, волосы, окурки сигарет, зубные щетки и практически любые предметы, с которыми контактировал тестируемый.

Сотрудники МЦ «Статус» подробно проконсультируют Вас по телефону или при обращении в МЦ по поводу возможности использования нестандартных образцов ДНК для исследования в каждом конкретном случае.

Сдав образцы, Вам остается только дождаться заключения, в котором будут подробное описание результата с указанием его достоверности и таблица генетических профилей обследованных лиц. Сокращение времени ожидания результатов вдвое возможно при заказе срочного исследования.

Порядок обращения по поводу установления родства

В Медицинском Центре «Статус», обособленном подразделении Лаборатории генодиагностики ООО «БиоЛинк», можно пройти исследование на генетическое установление родства (отцовства и других видов родства) как в частном порядке (в том числе и для последующего обращения в суд), так и по определению суда.

Важно! Официально установить или опровергнуть родство (например, изменить запись об отцовстве) МОЖЕТ ТОЛЬКО СУД.

Существуют различия между проведением судебной генетической экспертизы (в рамках рассматриваемого судом гражданского дела) и исследованием по установлению отцовства, проводимом в частном порядке.

Судебная генетическая экспертиза установления родства /отцовства

Молекулярно-генетическое исследование на предмет установления биологического родства / отцовства

Экспертиза ДНК проводится только по определению суда. Назначается судом в рамках рассматриваемого гражданского дела.

Исследование проводится по частному запросу физического лица.

Проведение экспертизы ДНК не является услугой, оказываемой физическому лицу, а является процессуальным действием, хотя лицо, назначенное судом, оплачивает проведение экспертизы. Заказчиком в данном случае выступает суд в рамках гражданского дела. Исполнителем – организация, которой поручено проведение экспертизы – ООО «БиоЛинк».

Исследование является платной услугой, оказываемой физическому лицу, в рамках договора на оказание платных медицинских услуг.

Экспертиза ДНК проводится на основании лицензии на осуществление медицинской деятельности. Организация и проведение судебной генетической экспертизы, в рамках гражданского судопроизводства, взаимоотношения между судом, назначившим экспертизу ДНК, и организацией-исполнителем, не относящейся к государственному судебно-экспертному учреждению, регламентируется Конституцией Российской Федерации, Гражданским процессуальным кодексом России (далее ГПК РФ), Федеральным законом от 31 мая 2001 г. N 73-ФЗ «О государственной судебно-экспертной деятельности в Российской Федерации», иными действующими нормативно-правовыми актами России.

Исследование проводится на основании лицензии на осуществление специализированной медицинской помощи по: генетике, медицинской генетике, лабораторной диагностике. Взаимоотношения между Заказчиком и Исполнителем регулируются законодательством РФ в сфере оказания медицинских услуг населению.

Результат экспертизы ДНК оформляется в виде«Заключения по результатам генетической экспертизы»(в соответствии с требованиями ГПК РФ) и направляется в суд, назначивший проведение экспертизы. Результат экспертизы оглашается только судом.

Результат исследования оформляется в виде «Акта генетического исследования» и выдается Заказчику, в соответствии с условиями договора.
Акт генетического исследования может быть принят судом или иным государственным органом в качестве доказательства наличия/отсутствия родства.

Важно! Методика выполнения исследований, достоверность получаемых результатов и стоимость в обоих случаях совпадают.

1. Проведение генетического исследования по установлению родства в частном порядке

1.1. Забор образцов ДНК для исследования в Медицинском центре «Статус».

Все лица, в отношении которых будет проводиться генетическое исследование по установлению родства, являются в Медицинский центр «Статус» согласно произведенной предварительной записи, по адресу: г. Новосибирск, ул. Владимировская, д.2/1, офис 209.

При себе необходимо иметь удостоверяющие личность документы: паспорт, свидетельство о рождении.

Важно! Если в качестве лица, в отношении которого предполагается проводиться генетическое исследование, выступает несовершеннолетний ребенок, то забор генетического материала производится лишь с разрешения и в присутствии одного из юридических родителей или официального опекуна, о чем необходимо предоставить соответствующие документы.

После заполнения необходимых документов, Заказчик генетического исследования производит оплату в кассу МЦ «Статус» в соответствии с прейскурантом. Осуществляется забор генетического материала – защечных мазков.

Срок выполнения генетического исследования составляет 10 (десять) рабочих дней (за исключением некоторых видов молекулярно-генетических исследований).

Акт генетического исследования (по выбору Заказчика, указанному в договоре) выдается либо на руки Заказчику, либо высылается заказным письмом с уведомлением по почте на указанный им в договоре адрес, копия Акта также может быть выслана на e-mail и другим лицам (при указании на это Заказчиком в договоре).

Важно! По телефону результат генетического исследования по установлению родства не сообщается (в том числе и Заказчику).Результат генетического исследования сообщается только тем лицам и теми способами, которые указаны Заказчиком в договоре.

1.2. Забор ДНК для исследования Заказчик осуществляет самостоятельно.

В данном случае первым этапом является приобретение набора для забора генетического материала.

Приобрести набор для самостоятельного забора генетического материала можно следующим образом:

1.2.1.В регистратуре МЦ «Статус» (по адресу: г. Новосибирск, ул. Владимировская, д.2/1, офис 209);

После приобретения набора, Заказчик самостоятельно, в соответствии с инструкцией, может забрать генетический материал и предоставить его для исследования (лично, порядок действий в данном случае совпадает с указанным в п.1.1., за исключением, соответственно, процедуры забора в условиях МЦ «Статус», или дистанционно, воспользовавшись последовательностью действий, указанных в п.1.2.2. (3,4 этапы)).

1.2.2.Дистанционно (например, для проживающих за пределами г. Новосибирска).

1 этап:

Заказать одним из удобных способов квитанцию об оплате набора (по телефону, e-mail, почте или оставить заявку на нашем сайте www.mcstatus.ru). Мы вышлем Заказчику по e-mail, факсу или почте квитанцию на оплату. После оплаты в любом банке Заказчик высылает нам копию квитанции с отметками банка (это можно сделать также факсом, e-mail или почтой).

Важно! Если для забора генетического материала (защечных мазков) Заказчик воспользуется наборами не нашего производства, то данные образцы расцениваются как НЕСТАНДАРТНЫЕ, что увеличивает стоимость исследования.

2 этап:

После получения от Заказчика копии квитанции, подтверждающей оплату стоимости набора, или после поступления на наш расчетный счет оплаты набора, на адрес Заказчика мы высылаем:

  • Наборы для самостоятельного забора генетического материалапо числу лиц, в отношении которых будет устанавливаться родство. Заказчик самостоятельно, в соответствии с инструкцией, производит забор генетического материала у всех лиц, подлежащих исследованию на предмет установления родства. Важно! Собранные образцы генетического материала от каждого человека должны быть упакованы отдельно в бумажные пакеты и подписаны.
  • 2 экземпляра договора;
  • Информированное согласие об обработке персональных данных;

3 этап:

По почте или курьерской службой Заказчик высылает на адрес: 630003, г. Новосибирск, ул. Владимировская, д.2/1, офис 209, ООО «БиоЛинк» обособленное подразделение медицинского отдела Медицинский центр «Статус», следующее:

  • Образцы генетического материала, собранные и упакованные в соответствии с инструкцией;
  • 1 экземпляр подписанного договора (второй остается у Заказчика);
  • Подписанное информированное согласие;

4 этап:

Важно! Оплату стоимости генетического исследования по установлению родства Заказчик производит только после получения нами образцов генетического материала, о чем мы уведомляем Заказчика по телефону или иным способом.

Срок проведения исследования по установлению родства составляет (в зависимости от вида исследования) от 5 до 25 рабочих дней с момента получения ООО «БиоЛинк» образцов и предоставления Заказчиком копии квитанции об оплате или поступления средств за проведения исследования на наш расчетный счет.

Акт генетического исследования (по выбору Заказчика, указанному в договоре) выдается либо на руки Заказчику, либо высылается заказным письмом с уведомлением по почте на указанный им в договоре адрес, копия Акта также может быть выслана на e-mail и другим лицам (указанным Заказчиком в договоре).

Важно! По телефону результат генетического исследования по установлению родства не сообщается (в том числе и Заказчику). Результат генетического исследования сообщается только тем лицам и теми способами, которые указаны Заказчиком в договоре.

2. Проведение судебной генетической экспертизы по определению суда

Если возникает необходимость официального подтверждения/исключения родства, то порядок действий следующий:

Физическое лицо (Истец) обращается в суд с гражданским иском и в суде ходатайствует о назначении судебной генетической экспертизы по установлению родства и поручении проведения данной ДНК-экспертизы Обществу с ограниченной ответственностью «БиоЛинк», на основании имеющейся у ООО «БиоЛинк» лицензии (№ ЛО-54-01-002001 от 01.03.2013 г. на осуществление медицинской деятельности), в рамках и в соответствии с действующим законодательством РФ в сфере назначения и проведения судебных экспертиз.

Далее возможны варианты:

2.1. Суд выносит определение о назначении судебной генетической экспертизы, в которой в соответствии со статьей 80 ГПК РФ, указываются: наименование суда; дата назначения экспертизы и дата, не позднее которой заключение должно быть составлено и направлено экспертом в суд, назначивший экспертизу; наименования сторон по рассматриваемому делу (обязательно точные почтовые адреса сторон); наименование назначенной экспертизы; факты, для подтверждения или опровержения которых назначается экспертиза; вопросы, поставленные перед экспертом; наименование организации, которой поручается проведение экспертизы; указано лицо, которое производит оплату экспертизы.

После чего суд высылает на наш почтовый адрес: 630003, РФ, г. Новосибирск, ул. Владимировская, д.2/1, офис 209, данное определение заказным письмом с уведомлением. На основании полученного определения, нами будут назначены дата и время забора генетического материала для проведения экспертизы, приглашены понятые.

В назначенное время обследуемые лица являются в Медицинский центр «Статус», обособленное подразделение Лаборатории генодиагностики ООО «БиоЛинк», по адресу: РФ, г. Новосибирск, ул. Владимировская, д.2/1, офис 209. При себе обследуемые лица должны иметь: паспорта, свидетельство о рождении. Забор генетического материала проводится ТОЛЬКО при одновременной явке всех лиц, в отношении которых проводится экспертиза. Лицо, которому судом поручена оплата экспертизы, производит оплату в кассу Медицинского центра «Статус», согласно прейскуранту услуг, действующему на момент забора генетического материала.

Сроки выполнения экспертизы – от 5 рабочих дней (в зависимости от степени сложности проводимого исследования) с момента получения образцов и произведения оплаты. Экспертное заключение высылается в адрес суда заказным письмом с уведомлением.

В соответствии с действующим законодательством РФ, результат проведенной экспертизы сообщается только суду , назначившему экспертизу.

2.2. Суд выносит определение о назначении экспертизы, в котором указывает, что проведение экспертизы поручается специалистам ООО «БиоЛинк», а забор генетического материала (защечных мазков) по усмотрению суда поручается другому медицинскому учреждению (например, по месту жительства обследуемых лиц) или проводится во время судебного слушания в зале суда. В данном случае ООО «БиоЛинк» предоставляет по письменному запросу расходные материалы (стоимость которых оплачивается дополнительно к стоимости экспертизы) и необходимые документы.

Суд высылает в адрес ООО «БиоЛинк» заказным письмом с уведомлением (630003, РФ, г. Новосибирск, ул. Владимировская, 2/1, офис 209) следующее:

  • Определение суда;
  • Биологический материал – защечные мазки (упакованный и опечатанный);
  • Протокол забора биологического материала;
  • Копии паспортов и/или свидетельств о рождении исследуемых лиц;
  • Копию оплаченной квитанции с указанием ФИО плательщика и пункта прейскуранта.

Срок выполнения экспертизы – от 5 рабочих дней (в зависимости о степени сложности и вида (срочное, стандартное) исследования) с момента получения образцов и оплаты. Экспертное заключение высылается в адрес суда заказным письмом с уведомлением.

В соответствии с действующим законодательством РФ, результат проведенной экспертизы сообщается только суду , назначившему экспертизу.

mcstatus.ru

Судебно-генетическая экспертиза

Наша команда профессионалов ответит на ваши вопросы

Центр Молекулярной Генетики проводит судебно-медицинские генетические экспертизы по определениям судов и постановлениям следственных органов на основании соответствующей лицензии на осуществление медицинской деятельности — проведении судебно генетической экспертизы вещественных доказательств и исследования биологических объектов, в том числе: генетической. Число организаций в России, имеющих такую лицензию, можно сосчитать по пальцам одной руки. Сегодня интернет наводнен предложениями по проведению генетической экспертизы. Прежде чем проводить такое исследование в определенной организации, удостоверьтесь в наличии у нее лицензии именно на вид деятельности, указанный выше. Организация должна быть сертифицирована и проводить исследования обязательно в России, а не где-то зарубежом. Помните, что суд не вынесет определение на проведение экспертизы в организации, не имеющей соответствующей лицензии, и не примет к рассмотрению заключение из такой организации. Вам придется проходить процедуру повторно и заново оплачивать экспертизу.

Помните, что официально установить или опровергнуть родство (например, изменить запись об отцовстве) МОЖЕТ ТОЛЬКО СУД. И только в рамках рассматриваемого судом гражданского дела может быть проведена судебно генетическая экспертиза.

Различия между судебно генетической экспертизой и исследованием по установлению отцовства, проводимом в частном порядке, представлены в Таблице 1:

Судебно-медицинская генетическая экспертиза установления родства / отцовства

Молекулярно-генетическое исследование на предмет установления биологического родства / отцовства

Важное замечание: Рассмотренные выше два вида исследований, то есть генетическое исследование и судебно-медицинская генетическая экспертиза различаются только по формальным юридическим признакам. Методика выполнения исследований, достоверность получаемых результатов обоих случаях совпадают. Несмотря на то, что оформление экспертного заключения является весьма трудоемкой процедурой, требующей специальной квалификации, стоимость генетической экспертизы в нашем Центре такая же, как и обычного генетического исследования по установлению родства.

Давайте подытожим всё сказанное выше.

1. Если Вам нужно официальное подтверждение или исключение родства / отцовства, то Вы подаете гражданский иск в суд и уже в суде ходатайствуете о назначении по делу судебно-медицинской генетической экспертизы отцовства и просите поручить Проведениеэкспертизы ДНК ООО «Центр Молекулярной Генетики» на основании имеющейся лицензии на осуществление медицинской деятельности — проведении судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств и исследования биологических объектов, в том числе:генетической.

2. Если Вы пока не готовы идти в суд или желаете проверить наличие или отсутствие родства / отцовства «для себя», то мы готовы провести для Вас молекулярно-генетическое исследование в частном порядке по Вашему запросу на основании лицензии на осуществление медицинской деятельности — осуществлению специализированной медицинской помощи по: генетике, лабораторной генетике.

www.dnalab.ru

Молекулярно-генетическая экспертиза: как ловят маньяков

Да, речь идет о ДНК и молекулярно-генетической экспертизе. Всё вроде бы просто: берется ДНК из клеток, оставленных преступником, и сравнивается с ДНК из клеток подозреваемого. На самом деле, конечно, простота тут кажущаяся. Если некоторые живые клетки можно разглядеть в слабенький школьный микроскоп, а то и невооруженным глазом (пример — яйцо), то ДНК — объект микромира, и так просто «взять» ее не получится. То же со «сравнением». ДНК человека составляют 3,1 млрд пар оснований. Прочтение (секвенирование) всего этого объема информации — задача крайне трудоемкая.

Сколько надо клеток?

О том, как составляется уникальный генетический портрет человека и какие технологии при этом применяются, мы поговорили с представителями компании Gordiz — единственного в России производителя реагентов для проведения генетических судебно-медицинских экспертиз. Для начала хотелось узнать, какой минимум биологического материала должен оставить преступник на месте преступления, чтобы молекулярно-генетический анализ стал возможен.

Схема полимеразной цепной реакции показывает основные этапы многократного копирования интересующего участка ДНК (маркера). На этапе денатурации под воздействием нагрева цепочка ДНК распадается на две нити. На этапе отжига при охлаждении к отдельным нитям ДНК присоединяются метки-праймеры. На этапе элонгации фермент полимераза достраивает вторую нить исследуемому участку.

«Можно в принципе получить результат из одной клетки, — говорит специалист компании Сергей Леонов, врач-биохимик, несколько лет проработавший судмедэкспертом. — Есть, например, приборы — лазерные микродиссекторы, которые позволяют вырезать из исследуемых образцов единичные клетки. Однако работа с таким малым количеством генетического материала не относится к стандартным технологиям и процессам и не гарантирует высокую надежность. Для нормального процесса нужно как минимум 10−15 клеток, и на самом деле это очень маленькое количество. Одно прикосновение рукой к предмету оставляет на нем сотни клеток».

Да, человек щедро разбрасывается генетическим материалом, но уже на этапе поиска биологических следов преступника судмедэкспертов поджидает много проблем. Например, отличный материал для исследования — кровь, следы которой хорошо заметны и в них обычно много ДНК. Но в пятне крови могли смешаться кровь преступника и жертвы. Как отделить клетки друг от друга? Задача несколько упрощается, если преступник и жертва разнополы: тогда возможна предварительная сортировка по наличию или отсутствию Y-хромосомы. Вообще работа со смешанными объектами — это часто встречающаяся ситуация: как правило, предметы, к которым прикасался злоумышленник, трогал кто-то и до него, и там можно найти биоматериал, принадлежащий десяткам людей. Для выделения нужного материала порой используют количественный метод: след преступника самый свежий, а значит, если количество каких-то клеток на поверхности объекта хотя бы на порядок превышает число остальных, можно предположить, что это и есть искомый биоматериал.

Типичный случай: после изнасилования эпителиальные клетки жертвы смешаны со сперматозоидами преступника. Для этого случая создан специальный метод. Поскольку эпителий имеет меньшую структурную прочность по сравнению с мужскими половыми клетками, его можно разрушить специальными химикатами, оставив сперматозоиды невредимыми и получив чистую фракцию клеток насильника.

Таким образом, собственно молекулярно-генетическому исследованию предшествует поиск необходимого материала и выделение его из разных смесей. Существуют, например, химические методы поиска следов крови там, где эти следы пытались отмыть. Есть технологии поиска клеток, оставленных на бумаге и других материалах.

Отмывание ДНК

Другой вопрос — сохранность биоматериала. С одной стороны, прочитан геном неандертальца и мамонта, то есть ДНК может сохраняться десятки тысяч лет. А с другой — в пятне крови, оставленном преступником пару дней назад, ДНК может не оказаться вовсе. Как же так? «ДНК — это одна из самых устойчивых биомолекул, — объясняет Сергей Леонов. — Если есть условия для хранения, она может оставаться в целости почти неограниченное количество времени. Лучшие условия — это высушивание, например на бумаге. Лично мне приходилось участвовать в работах по идентификации останков солдат, погибших во время Великой Отечественной. ДНК, обнаруженные в останках, сравнивались с сохранившимися образцами ДНК с фронтовых писем, которые предоставляли родственники погибших в этих местах воинов».

ДНК быстро разрушается под воздействием разных биологических, химических и физических факторов. Если биоматериал попадает во влажную среду, тут же начинается гниение. Гниение — это не что иное, как поедание клеток бактериями. Бактерии к тому же выделяют особые вещества — нуклеазы, которые разрушают весь находящийся поблизости генный материал: это оружие борьбы с вирусами. Если платок с пятном крови стал объектом гнилостных процессов, может оказаться, что пятно крови есть, а ДНК в нем уже нет. Наличие и концентрация в образцах генного материала будут выявлены химическими методами в ходе химического анализа, однако до того, как это произойдет, необходимо экстрагировать ДНК из клеточной среды. «Для этого, — говорит Сергей Леонов, — применяются специальные реагенты, которые полностью разрушают материал клетки, оставляя лишь ДНК. Затем ДНК электростатически связывается с сорбентом, который извлекается, а затем смывается водой. Так получается чистый водный раствор ДНК». Если согласно дальнейшему анализу генный материал есть в растворе и в требуемом количестве, можно приступать к созданию генетического «отпечатка».

На схеме показана классическая схема генетического анализа с использованием агарозного геля. Маркеры двигаются под воздействием электрического поля в блоке геля. Поскольку маркеры меньшего размера встречают меньшее сопротивление геля, они вырываются вперед. Окончательная идентификация маркеров происходит с помощью лазерной подсветки, возбуждающей флюоресценцию.

Польза от молчания

Первым делом следует заметить, что сравнивать полностью две ДНК никакой нужды нет. Генетически все люди на Земле идентичны на 99,99%, и потому есть смысл анализировать лишь сходство-различие определенных участков генома, которые обладают полиморфизмом, то есть представлены у разных людей в нескольких разных видах. «Золотым стандартом» на сегодняшний день считается исследование полиморфных маркеров, имеющих переменную длину. Маркеры — это участки «молчащей» ДНК, которые не выступают в качестве действующих генов и не кодируют белки. Зато они имеют характерную структуру — одни и те же последовательности пар оснований повторяются в них несколько раз. Разное число повторов и формирует тот самый полиморфизм. Разумеется, число вариантов длины одного маркера не равно числу людей на Земле. Если у маркера есть (условно) десять вариантов, то обладание маркером определенной длины означает лишь принадлежность к одной из десяти групп человечества, численностью в сотни миллионов человек каждая. Но если мы добавим сюда данные по второму полиморфному маркеру, группа, где встречается такое сочетание длин, заметно сузится. Речь пойдет уже о миллионах человек. При добавлении новых маркеров будет, как говорят в науке, экспоненциально нарастать дискриминационный потенциал, и наконец, число маркеров можно довести до такого количества, когда сочетание данных по их длинам станет уникальным для отдельной личности, а вероятность повтора этого «рисунка» практически сведется к нулю. Ключ к идентификации личности — всего-то дюжина полиморфных маркеров. Но тут мы вспомним, что ДНК — объект микромира, и ни линейкой, ни штангенциркулем ее участки померить невозможно. Здесь на помощь приходит биохимия и электричество.

Конструктивный бульон

Молекулы, даже такие сложные, как цепочки ДНК, настолько малы, что для молекулярно-генетического исследования требуется не одна копия интересующего нас участка генома (маркер), и не десять, и не сто, а миллионы и миллиарды. Требуется, таким образом, значительная концентрация копий маркеров, которая сделает возможным физическую индикацию параметров. Ядро, самый сложный момент всей технологии идентификации личности — полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая как раз и позволяет накопировать маркеров столько, сколько нужно. Реакция происходит в растворе, где присутствуют исследуемые ДНК, своеобразные метки-праймеры (фактически конструктивно идентичные небольшим участкам одной нити ДНК), находящиеся в «свободном плавании» формирующие ДНК азотистые основания — аденин (A), гуанин (G), цитозин ©, тимин (T), катализаторы и, наконец, главный действующий персонаж — фермент Taq-полимераза. Реакция происходит при переменных температурных режимах. Сначала с помощью нагрева ДНК денатурируется, то есть ее «двойная спираль» распадается на две нити, а пары оснований размыкаются. Затем при охлаждении праймеры отмечают границы интересующего нас маркера. Они примыкают к нитям ДНК, на небольшом участке как бы восстанавливая двойную структуру молекулы. После этого полимераза «берет» из раствора азотистые основания и, работая по одну сторону маркера, достраивает вторую нить для каждой из нитей денатурированной ДНК. В итоге вместо одной ДНК в растворе появляются две молекулы с частично восстановленной двойной структурой (в частности, для маркера). Затем все повторяется: денатурация с разделением двух нитей, праймеры и работа полимеразы. В результате цепной реакции мы получаем огромное количество копий имеющего нормальную двойную структуру маркера.

«ПЦР — очень сложный и дорогостоящий процесс, — говорит гендиректор компании Gordiz Владимир Орехов. — Количество компаний в мире, которые выпускают реагенты для такой реакции, можно посчитать на пальцах одной руки, и одна из них — наша — находится в России. Главная сложность в том, что в пробирке одновременно должны копироваться все маркеры и при этом не мешать друг другу. Сколько нужно маркеров? Американский стандарт CODIS включает в себя 13, европейский ESS — 12. Хотя маркеры из двух систем пересекаются, есть и отличия. Чтобы удовлетворить нужды специалистов, работающих в рамках разных стандартов, мы выпускаем реагенты для ПЦР с участием 19 маркеров. Такого количества хватит для идентификации уникальной личности, даже если население Земли вырастет на несколько порядков. Есть у нас и свое ноу-хау. Дело в том, что обычно реагенты для ПЦР выпускаются в жидком виде, что предъявляет особые требования к условиям хранения и транспортировки (в частности, нужна заморозка). Мы производим реагенты методом высушивания сырых смесей, и никаких особых условий для транспортировки им не нужно. Все это удешевляет процесс и упрощает задачу доставки реагентов, например, в отдаленные районы. Отмечу, что все сырье для реагентов отечественного производства».

Генетический анализатор — это аппарат, представляющий более продвинутую технологию сортировки выделенных из ДНК маркеров. Здесь маркеры двигаются в капиллярах из пористого полимера. На фото представлен прибор «НАНОФОР-05», выпущенный российской компанией «Синтол».

Гонки в поле

Продукт ПЦР — раствор с высокой концентрацией маркеров — это уже готовая база для проведения замеров. Методики могут несколько отличаться, но в основе их лежит процесс, знакомый многим, кто посещал кабинеты физиотерапии в поликлиниках. Это электрофорез — движение заряженных молекул в электрическом поле.

«До сих пор в России пользуются методом разделения продукта ПЦР на полиакриламидном геле, — рассказывает Сергей Леонов. — На смену этому методу, который берет начало с 1980-х, пришли генетические анализаторы. В них движение молекул происходит внутри капилляров из пористого полимера. Но суть одна: маркер, являясь катионом, при приложении электрического поля начинает двигаться, однако из-за сопротивления среды более длинная молекула тормозит, а короткая передвигается быстрее».

Таким образом, молекулы сепарируются по длине. Правда, некоторые маркеры могут иметь одинаковую длину (одинаковое число пар оснований), различаясь при этом по структуре размещения оснований. Чтобы избежать путаницы, потенциально схожие по размерам маркеры еще в процессе ПЦР получают флюоресцентную метку (одного из четырех или пяти цветов). В генетическом анализаторе маркеры подсвечиваются лазером, луч которого возбуждает свечение определенного цвета. После этого маркер может считаться окончательно идентифицированным. Итоговый документ анализатора — таблица, в которой цветом отмечено наличие в геноме тех или иных вариантов (аллелей) всех исследуемых маркеров. И это все?

Без свидетелей

«Нет, не все, — говорит Владимир Орехов. — Если совпадают образцы следа и живой ткани, возникает вопрос статистики — насколько вероятно совпадение. Теоретически вероятность существует, и по итогам молекулярно-генетических исследований вероятность 100% не выдается. Другое дело, что вероятность точной идентификации составляет 99% плюс много цифр после запятой. Но чтобы заключение имело все признаки научности, эту вероятность надо посчитать математически с учетом, например, популяционных частот для каждого признака (распространенный признак — больше вероятность совпадения, редкий — меньше). В связи с этим существует миф о том, что какие-то виды криминалистических экспертиз дают однозначный ответ «да» или «нет», а генетическая экспертиза дает лишь количественную оценку вероятности. Но на самом деле самый точный ответ дает именно генетика, а, например, почерковедение или дактилоскопия могут ошибаться, и такие случаи известны. Конечно, в генетическую экспертизу может вмешаться человеческий фактор (лаборант перепутал образец и т. п. ), но если исследование проведено правильно, оно дает строго научный и точный результат».

С течением времени молекулярно-генетическая экспертиза становится все более распространенным и все менее дорогим методом криминалистики. При этом эффективность ее крайне высока. С 1990-х годов в США, Германии, Великобритании действуют законы о геномной регистрации. Согласно этим нормативным актам исследуется и заносится в базу данных биологический материал, оставленный на месте преступления не установленными лицами. В эту же базу заносится генный «паспорт» людей, отбывающих наказание за особо тяжкие преступления. Такая база оказалась весьма эффективным средством раскрытия преступлений, в которых нет ни подозреваемых, ни свидетелей, так как в большом количестве случаев неопознанный генетический материал рано или поздно находил посредством базы своего хозяина или показывал связь с другими совершенными преступлениями. Такой закон принят в 2009 году и в России, однако финансирование его началось лишь недавно, и говорить о серьезном эффекте для нашей страны пока преждевременно.

www.popmech.ru

Смотрите так же:

  • Пособия по рисованию для детей Детские развивающие игры, уроки, поделки Игры для детей, поделки, аппликации, оригами, раскраски, рецепты. Учебник по рисованию для детей Изобразительное искусство Книжная полка Наше новое приобретение - учебник по рисованию для первого […]
  • Код права собственности Подтверждение права собственности на домен с помощью Google Analytics Если вы используете Google Analytics для отслеживания трафика веб-сайта в домене, вы можете подтвердить право собственности на домен и активировать G Suite с помощью […]
  • Жалоба на судоисполнителей Куда жаловаться на судебных приставов? Куда жаловаться на судебных приставов – такой вопрос нередко возникает у граждан, пытающихся вернуть долги при помощи судебных приставов-исполнителей. Конечного результата от приставов можно ждать […]
  • Следственный комитет комсомольск на амуре Комсомольский-на-Амуре следственный отдел на транспорте Адрес: 681013, Хабаровский край, г. Комсомольск-на-Амуре, ул. Красногвардейская, 34 Телефон: тел/факс 8 (4217) 54-36-88 Руководитель: Кутиков Дмитрий Сергеевич Заместитель […]
  • Ульяновск адвокаты по уголовным делам Адвокат по уголовным делам. Уголовный адвокат в Ульяновске. Адвокат Солодовников Денис Владимирович Не откладывайте на потом, звонок адвокату! Номер телефона адвоката по уголовным делам: (8-903-33-757-29) должен быть, записан у Вас в […]
  • Приказ о создании производства Приказ о создании производства Приказы по основной деятельности Приказ – правовой акт, издаваемый руководителем органа управления (предприятия, организации), действующим на основе единоначалия, для решения основных и оперативных задач, […]

Обсуждение закрыто.